摘要：为了解山东省生猪养殖、流通、屠宰加工等环节中猪圆环病毒2型（PCV2）的污染状况，选取全省16个地市63个场点（17个养殖场、19个屠宰场、17辆生猪运输车辆以及10个车辆洗消中心），采集环境样品520份，采用荧光PCR方法进行PCV2病原检测。结果显示：各环节均有PCV2污染，其中养殖场、屠宰场、运输车辆、洗消中心的场点阳性率分别为5.88%、5.26%、5.88%和20.00%，样品阳性率分别为2.01%、1.68%、0.75%和2.90%；阳性样品主要来自养殖场的兽医室以及粪污、屠宰场待宰圈和洗消中心污水。结果表明，环境中的PCV2污染面较广，从生猪养殖、运输到屠宰各环节均有散播病毒的风险，其中兽医室、粪污、待宰圈、洗消污水的风险更高。因此，需要加强各环节的生物安全控制，重点防范病毒传播风险较高的环节。本研究解释了近年来国内PCV2感染率一直居高不下的原因，从而为PCV2污染控制提供了依据。
　　
　　猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，1991年首次在加拿大被发现，随后被世界许多国家和地区陆续报道。2000年郎洪武等采用ELISA方法在我国未断奶仔猪中检测到PCV2抗体；2002年王忠田等采用PCR方法检测到PCV2病原。到现在为止，我国大部分省份报道发生了PMWS。
　　
　　猪圆环病毒（PCV）是一种单链环状闭合的DNA病毒，属于圆环病毒科圆环病毒属，根据抗原性不同，分为PCV1和PCV2。PCV1不具备致病力，PCV2可引起仔猪的多系统衰竭。PCV2病毒粒子呈二十面体对称，无囊膜，对外界环境抵抗力强，在70℃条件下可存活15 min，56℃条件下不能将其灭活，耐酸碱，但对苯酚、季胺类化合物、氢氧化钠和氧化剂敏感。
　　
　　PCV2可经口腔、呼吸道等途径感染不同年龄的猪，尤其是5~18周龄的仔猪。猪感染后临床表现为消瘦、行动迟缓、呼吸困难。PCV2也可导致仔猪免疫抑制，继而继发或混发其他病毒病或细菌性疫病。近年来，PCV2感染率一直居高不下。为探索其原因，对山东省养殖、流通和屠宰环节中的PCV2污染状况进行调查。
　　
　　材料与方法
　　
　　调查对象
　　
　　选择山东省16个地市的17个中小规模养猪场、19个屠宰场、10个洗消中心和17辆生猪运输车辆作为监测点，采集环境样品进行PCV2检测，详见表1。
　　 　　环境样本
　　
　　采集17个养殖场的兽医室、生猪饮用水（水源和猪舍饮水管出口水）、猪舍（地面和墙壁）、生产区土壤、饲料、粪污等6类共199份环境样品，19个生猪屠宰企业的待宰圈、屠宰车间环境样品以及血槽血等119份样品，17辆生猪运输车辆的车厢、底盘、轮胎、驾驶室（车座和脚垫）等133份环境样品，10个运输车辆洗消中心内洗消后车辆的车箱、底盘、轮胎、驾驶室（车座和脚垫）、洗消污水等69份环境样品。具体样品数量见表2。
　　 　　样本采集
　　
　　用无菌棉签蘸取PBS缓冲液，在取样部位来回擦拭3~5遍，然后放入PBS缓冲液中，低温保存；对于污水样品，每份采集量不少于5mL；对于饲料样品，每份采集不少于50g；对于血槽血样品，采用EDTA作为抗凝剂，每份采集量不少于2mL。
　　
　　样品检测
　　
　　将采集的样品，采用荧光PCR方法进行PCV2病原检测。采用MagNA   Pure 96 DNA and Viral NA Small Volume提取核酸，采用PCV2病原荧光PCR试剂盒进行荧光检测。
　　
　　结果与分析
　　
　　在调查的63个场点中，有5个场点检测到阳性，场点阳性率为7.94%；采集的520份样本中，共检出阳性样本9份，样品阳性率为1.73%。17个养殖场中，有1个养殖场检出4份兽医室和粪污阳性样本；19个屠宰场中，有1个屠宰场检出2份待宰圈阳性样本；17辆运输车辆中，有1个运输车辆驾驶室检出1份阳性样本；10个洗消中心中，有2个洗消中心检出2份洗消后污水阳性样本（表3）。从上述结果可以看出，在各环境样品中，PCV2污染主要集中在养殖场兽医室、养殖场粪污、屠宰场待宰圈、洗消中心污水等环境中。 　　讨论
　　
　　山东是养猪大省，年生猪出栏量约4000万头。PCV2是猪场常见动物疫病之一。本次调查显示，PCV2在生猪养殖、运输、屠宰、加工等各个环节均有污染，说明污染链条较长。
　　
　　调查发现，养殖场的兽医室、粪污样本阳性率较高。这说明养猪场如果不做好病死猪及粪污的无害化处理，将会存在PCV2等病原在养殖场内循环感染的风险；屠宰场的待宰圈检测到阳性样本，说明在待宰猪群中存在PCV2的潜伏感染，如果病毒进入屠宰环节，就会污染猪血球蛋白粉、血浆蛋白粉等猪饲料原料，继而将病毒带入养殖环节；运输车辆中的驾驶室以及洗消中心的洗消污水均检测到阳性样本，说明存在运输车辆消毒不彻底现象，同时洗消污水如果不做好无害化处理，也存在散播病毒的风险。
　　
　　针对PCV2调查结果，建议各个环节做好以下几点工作：一是养殖场要严格划分出病死猪剖检区域，剖检完毕后需严格消毒，并将病死猪脏器进行无害化处理，确保病毒不会通过剖检或因病死猪处理不当在养殖场内传播；二是养殖场要做好粪污的无害化处理，做到净道、污道分开，不交叉；三是生猪运输车辆进场前应彻底洗涤、消毒、烘干，且消毒范围不应仅限于车厢、轮胎等外部，还应包含驾驶室以及驾驶员；四是饲料原料生产过程中应严格执行高温消毒措施，以杀灭猪血中存在的病毒；五是洗消中心的洗消污水应加消毒剂沉淀后再外排，以免污染水源及环境。
　　
　　结论
　　
　　调查发现，山东省PCV2污染面较广，涵盖生猪养殖到屠宰各环节。养殖场的兽医室、粪污，以及屠宰场的待宰圈、运输车辆驾驶室、洗消中心的洗消污水等PCV2污染最严重，散播病毒风险较高，因此需要重点加强这些环节的生物安全控制。