樊福好：非洲猪瘟病毒感染快速判断技术
来源：玖卦文化传播 2023-07-03 14:14:03| 查看：
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目前，非洲猪瘟多点频发，防不胜防。对于急性发病、死亡的病例，需要快速判断，做出迅速的应对措施。如何在较短是时间内取得是否为非洲猪瘟的结论尤为重要。
常规的荧光定量PCR敏感性高，特异性强，对于低毒量的非洲猪瘟病毒感染可以提供重要的参考线索。但是，荧光定量PCR实施之前的核酸提取纯化过程极其繁琐，对技术操作人员的要求极为苛刻，多数荧光定量PCR检测失败的原因均来自于核酸纯化过程。值得一提的是机体提取，更可谓良莠不齐，真假难辨。目前值得信赖的核酸纯化首推手动过膜柱法提取，敏感性高出机器提取1-2个数量级。
而对于急性病例，诊断手法上可以两者相害取其轻，利用PCR的敏感性，并简化繁琐的核酸提取程序，缩短操作时间，帮助生产者快速做出决策，会产生意想不到的效果。建议如下：
1.荧光定量PCR的循环数设为35左右。
2.省略繁琐的、较难操作的核酸提取过程。
若是猪场发生了疑似非洲猪瘟的急性发病或死亡的病例，紧急、快速判断技术的具体操作过程建议如下：
1.用棉签沾取液体样品（唾液、血清、粪尿上清、透明组织液……），迅速放置于核酸免提液中。
2.按照常规荧光定量PCR试剂盒的要求加入上述核酸免提液，如5ul，10ul，……
3.循环数设为35左右。
若是出现阳性结果，诊断过程宣告结束。
如果未能获得结论，则需进行常规的核酸诊断程序，做出更加准确的判断。建议使用手动膜法过柱提取核酸，采用（50循环、起跳即阳）原则进行综合判断。
其他类似的病例（如猪瘟、猪繁殖呼吸综合征、环状病毒、猪流行性腹泻），均可以参照此方法进行免提取快速核酸扩增。
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