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干货 | 非瘟下不同感染类型猪场的采样策略

来源:硕腾猪业 2019-11-26 11:37:44| 查看:

  兵马未动,情报先行。非洲猪瘟检测是疫情监测及早期发现重要的环节,获得可靠的样本是准确诊断的前提条件之一。那么非瘟采样应该注意哪些问题?不同时期应该采取怎样的采样策略呢?
  
  首先,样品采集需要严密和专业的流程,既要保证样品的真实性,又要保证采样过程中避免其它猪只、环境的二次污染。其次,针对不同生产模式、不同压力类型的猪场应采取不同的策略方案,既能避免污染面的扩大又能节约人力财力,为精准清除、成功复产提供有力指导。
  
  一、理论基础
  
  1、非瘟病毒的稳定性
  
  感染猪排出的感染性病毒和DNA的稳定性(用Georgia 2007/1 ASFV毒株评估,在4℃和37时℃):
  
  病毒:粪便中半衰期为0.65和 0.29天,具感染力时间为8.48和3.71天;尿液中半衰期为2.19和0.41天,具感染力时间为15.33和2.88天;
  
  DNA:粪便中半衰期(在多种温度下)为8- 9天(4℃和12℃时, 至少98天能测到;21℃和37℃,35天能测到 );口腔液中半衰期(在多种温度下)为2-3天(4℃时,35天测到;12℃和21℃,14天测到);尿中半衰期为 32.54和19.48 天(至少126天测到)。
  
  非洲猪瘟病毒进入机体到血液中产生足够量的、并能用检测方法查出病毒的这段时间,称之为窗口期。感染猪不同部位阳性信号出现的时间不同,带毒量也不同。
  
  2、非洲猪瘟肌肉注射和接触感染猪带毒和排毒动力学试验Georgia 2007/1(Pirbright实验室)

 
  
  结论:
  
  (1)病毒血症出现时间与临床症状时间基本一致,间接接触比直接接触晚3天;
  
  (2)接触感染猪口、鼻拭子的排毒时间早于血液;
  
  (3)血液中的病毒量高,鼻试子的病毒量低,偶尔能分离到病毒。
  
  3、哈兽所步志高团队关于HLJ/18研究试验

 
  
  结论:
  
  (1)口肛排毒:肌注3-5天,同居接触6-10天;
  
  (2)病毒血症时间:肌注感染2-3天,同居接触8-9天;血液的病毒载量平均108.0HAD50/ml
  
  (3)潜伏期:肌注感染3-4天,同居感染9-10天
  
  (4)死亡时间:肌注感染6-9天,同居感染13-14天
  
  3.5~6.5lgHAD50不同剂量病毒载量、临床表现、死亡时间及病理变化无显著差异。
  
  4、口鼻拭子最先检测到核酸
  
  在自然感染情况下,病毒会最先在鼻腔和唾液中检测到,要比病毒在血液中出现的时间早3~4天。

 
  
  采样优先:口鼻拭子>血液>肛门拭子
  
  二、不同采样方式简介
  
  采样物资准备:长棉签、纱布、离心管、一次性手套、乳胶手套、注射器、防护服、鞋套、标签纸、记号笔、自封袋、泡沫箱、冰块等。
  
  采样注意事项:
  
  (1)所有采样器具均为一次性用品,多次换手套和鞋套、避免交叉污染;
  
  (2)纱布采样尽可能多点取样;
  
  (3)采样好及时用自封袋封存,放入装有冰块的泡沫箱,及时送检;
  
  (4)采样人员应穿防护服、戴鞋套、手套、口罩。
  
  1、唾液/口腔液采集

 
  
  唾液采集袋或棉绳挂于栏舍内或定位栏前,猪只充分咀嚼10分钟后,置于密封袋内,剪去袋子一角后挤压棉块或棉绳,将收集的唾液倒入收集管中,编号送检。
  
  母猪:在喂料前半小时采集唾液;
  
  商品猪:将棉袋悬挂于猪栏杆上,每栏1个。
  
  2、鼻腔拭子

 
  
  用干棉签长度15-20cm,深入鼻腔底部,旋转2-3次,采样完后,向试管加入1毫升生理盐水。

 
  
  小猪、定位栏、产房母猪、公猪不用保定;商品猪有问题猪建议口鼻液+血液。
  
  3、耳缘静脉、尾尖采血

 
  
  针对异常猪用针头扎末梢静脉,再用棉签蘸取数滴血、按压,放入装有1ml生理盐水的离心管中,可以有效减少污染,提高准确度。
  
  耳缘静脉采血:捏压近心端的耳缘静脉,用头皮针扎血管;
  
  尾根/尖采血:猪站立姿势,用14号针头在尾根末梢轻扎几下,用棉签按压取血。
  
  异常猪(不吃、发烧、流产、死亡):采集鼻黏液+血液(死亡不久猪可以心脏采血、异常母猪尾静脉采血),严禁解剖!
  
  4、环境采样

 
  
  阴性场监测:人员(手、鞋、衣物)、车辆(猪车、中转车、饲料车等)、环境道路、出猪台、中转站、物资等。
  
  阳性污染场:主要侧重内部(如猪栏、道路、地沟、水源、料线、办公生活区、人员等),为精准清除了解污染面控制污染源,也为复养排雷。
  
  5、进出场人员监测
  
  手部、鞋底、衣物取样:用棉签头部先蘸取生理盐水然后在手指甲缝、鞋底、衣物、头发、耳部、鼻腔转动取5-7个样,最后将棉签折断放回离心管中,加1ml生理盐水。做好标记,然后用自封袋封好,放在装有冰块的泡沫箱中。

 
  
  6、车辆监测
  
  驾驶室(脚踏、座位)、轮胎、车厢、底盘:用纱布先沾湿生理盐水在各个位置擦拭取样,最后将纱布放回自封袋内。做好标记,放在装有冰块的泡沫箱中。(每部车取样不少于20个区域,混样检测)
  
  运猪车、中转车、饲料车、后勤车等定期(每周1次)采样送检。

 
  
  7、洗消中心采样
  
  车辆进出通道地面、洗消房、水沟、污水池等采样:固体表面用纱布取样、尽可能多点采集;污水池用一次性吸管或注射器抽1-2ml。

 
  
  8、中转站/出猪台采样
  
  出猪台、吊桥、赶猪道、中转栏:用纱布采样,方法同上(建议中转站、出猪台1-2周检测一次)。

 
  
  三、高风险猪场采样要点
  
  环境样:外围道路、出猪台、中转台、车辆等定期检测;
  
  猪只:死亡猪只40斤以上猪采集深部鼻腔液(合样、每天送检)
  
  人员:物料司机、隔离返场人员、其他访客等

 
  
  四、精准剔除采样要点
  
  母猪:口鼻拭子,异常猪鼻拭子+尾静脉血
  
  大栏商品猪:采集口腔液、异常猪做好防护进栏采鼻腔拭子
  
  环境样:食槽、走道、排泄区、道路、生活区等纱布取样了解污染面
  
  人员:手部、鞋底、衣角、头发、鼻孔、耳廓等
  
  母猪群先发生场:执行母猪全群检测口鼻拭子,1天-5天-10天三轮筛查,结合CT值和阳性数量,选择淘汰方式。保育、育肥区尽量不进猪栏,采环境样+人员为主。
  
  商品猪群先发生场:快速处理发病猪栏,减少污染面,封锁发病猪舍。各区域人员不交叉。环境采样摸查+小比例口鼻拭子抽查。
  
  五、复产期采样评估
  
  1、复养场采样点

 
  
  场1:发病清理2个月后检测

 
  
  场2:发病清理6个月后检测

 
  
  2、复产前消毒效果评估
  
  方法1:枯草芽孢杆菌微生物指示剂
  
  洗消前将枯草芽孢杆菌涂于,猪舍、猪栏、漏粪沟、吊顶等位置,洗消结束后检测芽孢杀灭率。
  
  结果判断:芽孢杀灭率达99.9%以上,判定洗消合格。
  
  方法2:伪狂犬疫苗毒作为非瘟评价标记物
  
  将伪狂犬疫苗稀释后涂抹于,墙面、地面、猪舍、猪栏、漏粪沟、吊顶等位置,按洗消流程结束后检测。
  
  结果判断:洗消后检测伪狂犬疫苗毒病原。
  
  方法3:微生物ATP荧光检测仪

  
  结果判断:检测仪RLU值低于200合格。
  
  3、病毒核酸破坏试验

 
  
  试验结果表明,硕腾的复合碘酸消毒剂“百胜-30”可完全杀灭非瘟病毒,1:200稀释30分钟内可以破坏病毒核酸。在无安全可靠疫苗的现在,抓好生物安全,选择安全、有效的消毒剂是必要的。
  
  六、总结

  
  通过唾液样本、喉、鼻拭子的采集,可以及早发现感染猪只,实现早发现早剔除。同时针对不同生产模式猪场制定不同策略,以防止污染面扩大同时节约人力财力!

 

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