兵马未动，情报先行。非洲猪瘟检测是疫情监测及早期发现重要的环节，获得可靠的样本是准确诊断的前提条件之一。那么非瘟采样应该注意哪些问题？不同时期应该采取怎样的采样策略呢？
首先，样品采集需要严密和专业的流程，既要保证样品的真实性，又要保证采样过程中避免其它猪只、环境的二次污染。其次，针对不同生产模式、不同压力类型的猪场应采取不同的策略方案，既能避免污染面的扩大又能节约人力财力，为精准清除、成功复产提供有力指导。
一、理论基础
1、非瘟病毒的稳定性
感染猪排出的感染性病毒和DNA的稳定性（用Georgia 2007/1 ASFV毒株评估，在4℃和37时℃）：
病毒：粪便中半衰期为0.65和 0.29天，具感染力时间为8.48和3.71天；尿液中半衰期为2.19和0.41天，具感染力时间为15.33和2.88天；
DNA：粪便中半衰期（在多种温度下）为8- 9天（4℃和12℃时， 至少98天能测到；21℃和37℃，35天能测到 ）；口腔液中半衰期（在多种温度下）为2-3天（4℃时，35天测到；12℃和21℃，14天测到）；尿中半衰期为 32.54和19.48 天（至少126天测到）。
非洲猪瘟病毒进入机体到血液中产生足够量的、并能用检测方法查出病毒的这段时间，称之为窗口期。感染猪不同部位阳性信号出现的时间不同，带毒量也不同。
2、非洲猪瘟肌肉注射和接触感染猪带毒和排毒动力学试验Georgia 2007/1（Pirbright实验室）
结论：
（1）病毒血症出现时间与临床症状时间基本一致，间接接触比直接接触晚3天；
（2）接触感染猪口、鼻拭子的排毒时间早于血液；
（3）血液中的病毒量高，鼻试子的病毒量低，偶尔能分离到病毒。
3、哈兽所步志高团队关于HLJ/18研究试验
结论：
（1）口肛排毒：肌注3-5天，同居接触6-10天；
（2）病毒血症时间：肌注感染2-3天，同居接触8-9天；血液的病毒载量平均108.0HAD50/ml
（3）潜伏期：肌注感染3-4天，同居感染9-10天
（4）死亡时间：肌注感染6-9天，同居感染13-14天
3.5~6.5lgHAD50不同剂量病毒载量、临床表现、死亡时间及病理变化无显著差异。
4、口鼻拭子最先检测到核酸
在自然感染情况下，病毒会最先在鼻腔和唾液中检测到，要比病毒在血液中出现的时间早3~4天。
采样优先：口鼻拭子>血液>肛门拭子
二、不同采样方式简介
采样物资准备：长棉签、纱布、离心管、一次性手套、乳胶手套、注射器、防护服、鞋套、标签纸、记号笔、自封袋、泡沫箱、冰块等。
采样注意事项：
（1）所有采样器具均为一次性用品，多次换手套和鞋套、避免交叉污染；
（2）纱布采样尽可能多点取样；
（3）采样好及时用自封袋封存，放入装有冰块的泡沫箱，及时送检；
（4）采样人员应穿防护服、戴鞋套、手套、口罩。
1、唾液/口腔液采集
唾液采集袋或棉绳挂于栏舍内或定位栏前，猪只充分咀嚼10分钟后，置于密封袋内，剪去袋子一角后挤压棉块或棉绳，将收集的唾液倒入收集管中，编号送检。
母猪：在喂料前半小时采集唾液；
商品猪：将棉袋悬挂于猪栏杆上，每栏1个。
2、鼻腔拭子
用干棉签长度15-20cm，深入鼻腔底部，旋转2-3次，采样完后，向试管加入1毫升生理盐水。
小猪、定位栏、产房母猪、公猪不用保定；商品猪有问题猪建议口鼻液+血液。
3、耳缘静脉、尾尖采血
针对异常猪用针头扎末梢静脉，再用棉签蘸取数滴血、按压，放入装有1ml生理盐水的离心管中，可以有效减少污染，提高准确度。
耳缘静脉采血：捏压近心端的耳缘静脉，用头皮针扎血管；
尾根/尖采血：猪站立姿势，用14号针头在尾根末梢轻扎几下，用棉签按压取血。
异常猪（不吃、发烧、流产、死亡）：采集鼻黏液+血液（死亡不久猪可以心脏采血、异常母猪尾静脉采血），严禁解剖！
4、环境采样
阴性场监测：人员（手、鞋、衣物）、车辆（猪车、中转车、饲料车等）、环境道路、出猪台、中转站、物资等。
阳性污染场：主要侧重内部（如猪栏、道路、地沟、水源、料线、办公生活区、人员等），为精准清除了解污染面控制污染源，也为复养排雷。
5、进出场人员监测
手部、鞋底、衣物取样：用棉签头部先蘸取生理盐水然后在手指甲缝、鞋底、衣物、头发、耳部、鼻腔转动取5-7个样，最后将棉签折断放回离心管中，加1ml生理盐水。做好标记，然后用自封袋封好，放在装有冰块的泡沫箱中。
6、车辆监测
驾驶室（脚踏、座位）、轮胎、车厢、底盘：用纱布先沾湿生理盐水在各个位置擦拭取样，最后将纱布放回自封袋内。做好标记，放在装有冰块的泡沫箱中。（每部车取样不少于20个区域，混样检测）
运猪车、中转车、饲料车、后勤车等定期（每周1次）采样送检。
7、洗消中心采样
车辆进出通道地面、洗消房、水沟、污水池等采样：固体表面用纱布取样、尽可能多点采集；污水池用一次性吸管或注射器抽1-2ml。
8、中转站/出猪台采样
出猪台、吊桥、赶猪道、中转栏：用纱布采样，方法同上（建议中转站、出猪台1-2周检测一次）。
三、高风险猪场采样要点
环境样：外围道路、出猪台、中转台、车辆等定期检测；
猪只：死亡猪只40斤以上猪采集深部鼻腔液（合样、每天送检）
人员：物料司机、隔离返场人员、其他访客等
四、精准剔除采样要点
母猪：口鼻拭子，异常猪鼻拭子+尾静脉血
大栏商品猪：采集口腔液、异常猪做好防护进栏采鼻腔拭子
环境样：食槽、走道、排泄区、道路、生活区等纱布取样了解污染面
人员：手部、鞋底、衣角、头发、鼻孔、耳廓等
母猪群先发生场：执行母猪全群检测口鼻拭子，1天-5天-10天三轮筛查，结合CT值和阳性数量，选择淘汰方式。保育、育肥区尽量不进猪栏，采环境样+人员为主。
商品猪群先发生场：快速处理发病猪栏，减少污染面，封锁发病猪舍。各区域人员不交叉。环境采样摸查+小比例口鼻拭子抽查。
五、复产期采样评估
1、复养场采样点
场1：发病清理2个月后检测
场2：发病清理6个月后检测
2、复产前消毒效果评估
方法1：枯草芽孢杆菌微生物指示剂
洗消前将枯草芽孢杆菌涂于，猪舍、猪栏、漏粪沟、吊顶等位置，洗消结束后检测芽孢杀灭率。
结果判断：芽孢杀灭率达99.9%以上，判定洗消合格。
方法2：伪狂犬疫苗毒作为非瘟评价标记物
将伪狂犬疫苗稀释后涂抹于，墙面、地面、猪舍、猪栏、漏粪沟、吊顶等位置，按洗消流程结束后检测。
结果判断：洗消后检测伪狂犬疫苗毒病原。
方法3：微生物ATP荧光检测仪
结果判断：检测仪RLU值低于200合格。
3、病毒核酸破坏试验
试验结果表明，硕腾的复合碘酸消毒剂“百胜-30”可完全杀灭非瘟病毒，1:200稀释30分钟内可以破坏病毒核酸。在无安全可靠疫苗的现在，抓好生物安全，选择安全、有效的消毒剂是必要的。
六、总结
通过唾液样本、喉、鼻拭子的采集，可以及早发现感染猪只，实现早发现早剔除。同时针对不同生产模式猪场制定不同策略，以防止污染面扩大同时节约人力财力！
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