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干货!新型猪繁殖与呼吸综合征病毒株的,鉴定与分离!

来源:军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 2019-08-16 11:53:14| 查看:

  引言
  
  猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的致病因子,由类似NADC30的PRRSV株引起的疾病暴发在中国引起极大关注。在本研究中,从中国北方的仔猪肺组织中分离出两个新出现的PRRSV菌株,分别命名为PRRSV-ZDXYL-China-2018-1和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株。分离的病毒属于基因型2 PRRSV的谱系1,与开放阅读框(ORF5)限制性片段长度多态性(RFLP)1-7-4的US株密切相关。从患病断奶仔猪群中鉴定出两株菌,PRRSV-ZDXYL-China-2018-1和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株的完整基因组分别长为15093nt和15110nt,与在美国分离ISU10和NADC34菌株分别具有96.7%-97.0%和97.1%-97.4%的相似性。我们的研究结果表明,中国出现了ORF5 RFLP 1-7-4-like PRRSVs,这可能对PRRSV预防构成巨大挑战。
  
  材料与方法
  
  从中国黑龙江省采集感染断奶仔猪群(4至8周龄)30份肺组织样本。将样品进行RNA提取,反转录cDNA,利用RT-PCR技术鉴定并测序[9]。用于扩增ORF5的引物是正向的:5'-CTGTGCTATCATTGCAGAAGTCGT-3'和反向:5'-TGGCAATTTGAATGTTCAAGTATG-3'。检测PRRSV阳性组织样本的猪圆环病毒2(PCV2),Torque teno sus病毒(TTSuV1-2),猪细小病毒(PPV6.7),经典猪瘟病毒(CSFV)和伪狂犬病病毒(PRV)。如前所述分离PRRSV-ZDXYL-China-2018-1菌株,第三代分离菌株(PRRSV-ZDXYL-China-2018-1菌株)经间接免疫荧光验证正确[1]。在该研究中获得了两个PRRSV完整基因组序列,和来自NCBI GenBank的PRRSV的GP5基因组用于比对和系统发育分析。使用邻接方法进行完整PRRSV基因组的系统发生分析。
 
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  结果与讨论
  
  我们首次报道了两株与ORF5 RFLP 1-7-4菌株的出现密切相关的PRRSV新菌株在黑龙江省。从病猪的肺组织中分离和鉴定出PRRSV-ZDXYL-China-2018-1菌株和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株。我们确定了PRRSV-ZDXYL-China-2018-1和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株的GP5序列显示突变的B细胞表位,T细胞表位,信号肽和外病毒粒子,跨膜(TM)和病毒粒子内域以及初级中和表位(PNE)[2],它们不仅与标准菌株IA / 2015 / ISU-10(MF326997)和IA / 2014 / NADC34(MF326985)不同位置的突变,而且与中国发现的菌株液有显着差异[3]。 Nsp2蛋白和ORF5 RFLP 1-7-4模式中的缺失可用作分子标记,以鉴定来自中国其他谱系1 PRRSV的1-7-4分离株。应进一步开展研究,如疾病预防,致病性和流行病学研究,以深入了解中国的ORF5 RFLP 1-7-4-like PRRSVs。
 

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