猪传染性疾病--附红细胞体的诊断

来源：中国养猪网 2010-10-28 14:30:04| 查看：次

（一）直接镜检

1．血样制备采集该病原血样时，宜用柠檬酸盐作抗凝剂。若用EDTA作抗凝剂，易使其失去感染性。若用肝素作抗凝剂，易干扰其PCR检测。感染的细胞 ‘[加入聚乙烯毗略烷酮（终极浓度为6.7%），可保留于液氮中。该病原为支原体，可用10010甘油／10%马血清于-700CF保留(Nonaka等，1996)。Wright-Giemsa染色后，该病原为蓝紫色。叮睫橙染色可显示其单体。虫血症期间，作血涂片，用叮吮黄染色镜检，观察病原。

2．采血将血样在水浴锅加热至38℃，制成血液抹片，经Giemsa染色，于油镜下观察。若有感染，可于红细胞附近中发现猪附红细胞体。因为该染色方法的色素会沉着在红细胞上，常被误以为是附红细胞体，还有一些红细胞的本身结构，如帕彭海姆体、Heinz氏小体、Howell-Jolly氏体常被误以为是附红细胞体，导致假阳性和误诊。有人以为目前误诊较严峻。

3．新鲜血液检查取病猪耳静脉鲜血1滴置于载玻片上，加等量生理盐水混匀后盖上盖玻片，在400～600倍暗视野显微镜下观察，可见球形、豆点状、杆状或颗粒状虫体或迅速置油镜下观察，可见红细胞内及血浆中有不规则雀斑状虫体，虫体在红细胞内较多，有的区域比较密集甚至成堆。因为虫体附着在红细胞表面有张力作用，使红细胞在视野内上下震惊或左右运动如同。一个附近嵌满蓝色发光珍珠的球体。红细胞边沿不整洁呈现菠萝状、锯齿状或不规则状。血浆呈半透明的波折状，虫体游离在血浆中，较活跃，能做舒展、旋转、翻滚等多方向运动。

4．血涂片染色检查取病猪耳静脉血液进行涂片，烘干，滴上甲醇固定，晾干滴上姬姆萨染色液染色12h后冲刷晾干镜检。可见红细胞表面有很多圆钮形、卵形、杆状紫红色或粉红色的虫体，当调节微螺旋钮时，虫体折光性较强中心发亮，形似气泡。或滴上瑞氏染色液染色后，于600-1 000倍油镜下观察，发现红细胞表面附有多形态的虫体，蓝紫色红细胞边沿凸凹不平。如不能现场检查则采取经肝素或柠檬酸钠处理的抗凝血ImL，加10%福尔马林溶液ImL混匀送实验室用、厂啶樺汍 n察，猪附红细胞体呈现由浅至深的枯黄色。

（二）动物试验

用可疑患附红体病的动物的血液接种健康实验动物小鼠、兔、鸡等）或鸡胚，接种后观察其表现并采血查附红细胞体。应用切除脾的健康猪进行人工感染试验，被以为是诊断本病的最确实方法，感染后3-20d，被感染猪表现急性发病，并可检到附红细胞体。此法费时较长，但有一定辅助诊。

（三）血清学试验

用血清学方法不仅可诊断本病，还可进行流行病学调查和疾病监测，尤其是1986年Lang等建立了将附红细胞体与红细胞分廾，用以制备抗原的方法以后，更加推动了血清学方法的发展，

（四）分子生物学技术诊断

20世纪90年代开始有利用DNA探针技术和聚合酶链式反应( PCR)技术的报道。例如Oberst等在猪附红细胞体感染高峰期放血，分离猪附红细胞体，提取DNA，以，P标记制成探针，证实能区别猪附红体感染的猪和非感染猪，并且不与其他疾病感染猪的血清中的DNA发生杂交反应。后来他们又用PCR技术检查猪附红细胞体感染，证实其敏感性1：查出）lpg的DNA，并证实猪被猪附红细胞体感染24h即可泛起PCR阳性。

（五）鉴别诊断

在I伤床上与猪瘟、弓形虫病、链球菌病和猪肺疫等疫病很相似，应留意鉴别诊断。

当前在发病猪群中附红细胞体病常与猪瘟、猪链球菌病、猪呼吸道病综合征、传染性肋膜肺炎、猪副嗜血杆菌病、圆环病主Ⅱ型感染耳病等混合感染或继发感染，在临床上症状表现为多样性与复杂性，诊断时需留意鉴别。

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